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薄層層析硅膠板制作和操作方法

文章來源:本站人氣:5038發表時間:2016-07-22

  薄層層析硅膠板就是我們通常所說的硅膠板,要了解薄層層析硅膠板制作與操作方法必須先知道:薄層層析(TLC)的原理;薄層層析法是一種微量而快速的分析方法,操作容易,設備要求低,但對于每一種被分離的物質都需要各自獨立的方法,TLC主要應用于氨基酸、多肽、糖脂、核苷酸和生物堿類多種物質的分離和鑒定。其主要原理為根據樣品組分與吸附劑的吸附力及其在展層溶劑中的分配系數的不同而使混合物分離。

薄層層析硅膠板

  薄層層析硅膠板操作方法

  a. 硅膠板于100℃烘箱活化30 min; 冷卻后,在距底端2cm 處劃直線,用鉛筆輕輕標出點樣位置,兩個點樣點一般距離1-1.5 cm;

  b. 點樣,每次點樣量一般為0.8 μL(視情況而定),點樣點要盡量小,如需加量,待點樣點干燥后再在同一點上第二次、第三次點樣。每次點樣都要在上次點樣點干燥后進行,避免點樣點過度擴散影響實驗結果;

  c. 室溫干燥后,快速將點好樣的硅膠板放入已提前加入展開劑的層析缸,密封層析缸,開始展層;

  d. 待展層劑上沿距離硅膠板上部邊緣2 cm時取出硅膠板,室溫風干后于50℃烘箱烘干5 min,取出,待硅膠板冷卻后放入層析缸進行第二次展層;推薦產品:發泡硅膠板

  e. 展層完畢后室溫干燥并選擇合適的顯色方法進行顯色并計算其Rf值。

  顯色方法:薄層色譜的顯色方法有很多,一些通用的顯色方法如下:紫外照射法、熒光試劑法及紫外照射法等;但根據待測物的不同要選擇合適的顯色方法。

  以上就是薄層層析硅膠板制作和操作方法僅供參考,瑞博橡膠提醒你:在操作或實驗的時候應該注意一下幾點。

  1.樣品的溶解:將樣品溶于展開劑極性相近、揮發性高的有機溶劑。

  2.點樣:控制上樣量,點樣基線距底邊2.0 cm,控制樣點直徑(5 mm)及點間距離(1-1.5 cm),避免因擴散而影響檢測(下圖),點樣時必須注意勿損傷薄層表面。

  3. 展層:展層容器必須密封,提前加入展開溶劑,使溶劑蒸氣達到平衡。展開劑不能高于上樣點,否則,無法求得Rf值和準確判斷粗產物中各組分在薄層板上的相對位置。

  4. 展開劑的選擇條件:有良好的溶解性、使待分離組分間分開、待測組分的Rf值在0.2~0.8之間、不與待測組分或吸附劑發生化學反應、沸點適中,黏度較小、展開后組分斑點圓且集中、混合溶劑最好用新鮮配制。

  5. 邊緣效應:邊緣效應是樣品在層析時,薄層板兩邊的斑點比中間斑點移動快,并向兩邊偏斜。其原因是用混合溶劑展開時,極性較弱和沸點較低的溶劑在薄層板兩邊沿處較易揮發,使薄層板上的展開劑比例不一,而出現邊緣效應,解決邊緣效應最有效的方法是剪去薄層板浸入展開劑一端的兩角。

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